Diabetologia：激活但功能性受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现去甲自身免疫到再次出现1型白血病医学疼痛的重大突破率在幼儿时期就有很好的所述，多个去甲自身免疫阴性的幼儿在此之后有70%在血清转换后10天内患上白血病，而随访15年的幼儿这一人口比例减少到84%。即便如此，占总医学1型白血病一半以上的型1型白血病的得病程序还没赢取充分的研究者。

越来越多的人开始应用于分期的系统来界定1型白血病的重大突破：形态在再次出现多种去甲自身免疫时带入第1在此之后，再次出现血糖出现异常时带入第2在此之后，再次出现疼痛时带入第3在此之后。一些多发去甲自身免疫阴性的形态，在1期和2期，重大突破更快，并发展为得病的1型白血病。我们在此之后所述了各别在首次扫描到多种去甲自身免疫比对后据估计10年无白血病的近乎慢重大突破者，这分组病症次数少，但特质非常明确。随后，我们发现去甲自身蛋白特异性CD8+T肝细胞反可不在重大突破更快的病症在此之后基本不发挥作用，但在近期得病和普遍发挥作用的白血病病症在此之后很较易扫描到。这可能说明，与重大突破病症相比之下，这些病症自身免疫反可不的恒定增强。

早期研究者说明，尽管恒定性T肝细胞(Treg)数量正常，但白血病病症发挥作用一些功用缺陷，其在此之后都有对IL-2的反可不并能降低。此外，白血病病症在此之后的效可不CD4+T肝细胞可能对恒定非常具抵抗性，表现为效可不T肝细胞的诱发减弱，自然地产生的Treg和质外产生的游离Treg，以及蛋白经历的CD4+T肝细胞在此之后IL-2反可不减弱。本研究者的借此是所述了CD4+恒定性T肝细胞(Treg)在一小群近乎更快重大突破者在此之后的特质，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的横向研究者，在21岁所列住院的病症亲属在此之后核对1型白血病的致命状况。我们在此之后所述了长期更快重大突破者的特质，他们保持稳定多重去甲自身免疫阴性少于10年，但没再次出现白血病的医学疼痛，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名再次保持稳定无白血病并愿意提供大量体内比对的更快重大突破者纳入T和B肝细胞功用分析。在目前的研究者在此之后，8名慢重大突破者(SP分组)，在此之后位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的去甲自身免疫阴性。所有的组织者都始终保持1型白血病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身免疫对某些蛋白的阴性反可不，然而，一名病症已经始终保持2期据估计6年，但没再次出现医学疼痛，一名病症被诊断为白血病，该测试者72岁，在采集检验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析在此之后对该NAD完成了单独指标。受控外周血单个核肝细胞(PBMCs)，有别于多实例流式肝细胞拳法和T肝细胞诱发试验指标NAD在此之后Treg的增益、环境状况和功用。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、比如说和回归)完成无监督聚类分析，指标Treg环境状况。

结果：与心理健康NAD相比之下，来自慢重大突破质的遗忘CD4+T肝细胞的监督聚类标示出，激活命的遗忘CD4+ Treg增益减少，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)暗示减少有关。一名HbA1c升高的病症与重大突破更快者和匹配的比对分组相比之下，Treg谱有所相异。功用分析说明，与心理健康NAD相比之下，来自更快重大突破质的Treg内源性的CD4+效可不T肝细胞诱发引人注意受损。表现为对效可不CD4+T肝细胞CD25和CD134暗示的诱发减少。

所示1 深入的环境状况分析标示出，CD4+Treg亚型在慢重大突破队列在此之后减少。由FlowSOM转化的Treg会议室，周遭在来自所有NAD的活命CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标上物暗示鉴别出10个元簇:遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;中央线程Treg_1;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;和中央线程Treg_4。(a)应用于9个相异Treg标上转化的10个元簇的MST。每个节点均是由一个空降兵(100个空降兵)，非常大的元空降兵(10个元空降兵)在节点分组周遭上色。每个节点在此之后的饼所示指出单个标上的暗示层次。(b)每个元聚类的热所示，以标示出整质标上暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化所示，以及FlowSOM辨认的每个元簇的大块。(e-l)比起稀土元素为每个metacluster木箱中央线所示(稀土元素> 0.05%)断定为HD和SP分组:中央线程Treg_2 (e),中央线程Treg_3 (f),中央线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T肝细胞(l)。蓝色橘色均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应用于CITRUS的预测模型证实，Treg增益的减少是重大突破更快的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)相对SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相似之处。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的均是由性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示完成受控，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(斑点)分组以及NADSP 606(蓝色)在此之后CD25+ cd127的增益统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控姪集的木箱中央线所示;(c) HLA-DRloGITR−(中央线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(中央线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(中央线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+中央线程T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，斜线突出的簇被辨认为SP和HD队列错综复杂的相异。(j)木箱中央线所示标示出了在SP(斑点)和HD(灰点)分组在此之后，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比起稀土元素(人口比例)。(k)直方所示标示出每个簇的环境状况(白色)和Treg标上比起暗示与背景暗示(蓝色);上列，中央线程Treg_3;下面悄悄，中央线程Treg_4。背景与所有其他簇在此之后标上的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与心理健康献血者相比之下，重大突破更快者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T肝细胞元簇(遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;中央线程Treg_2;中央线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个暗示标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热所示(sp606不都有在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇在此之后所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，标示出直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有NAD都有，p< 0.05(蓝色)NADSP 606和匹配的HD不都有在测试在此之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs在此之后GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，标示出直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自更快重大突破的CD4+ treg肝细胞压制效可不CD4+T肝细胞的并能降低。SP分组用蓝色的中央线和橘色指出，HD分组用金色的中央线和橘色指出，蓝色的中央线/橘色指出NADsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(可不答者)被标上为CFSE, Treg按通过观察的人口比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活命化肝细胞，培植3天后完成流式肝细胞拳法扫描。(a-d)与CD4+可不答者比起可不的treg培植(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD可不答者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发平均值。应用于阴性比对(激活命的自发肝细胞不含treg)计算诱发平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

所示5 效可不CD4+T肝细胞对更快重大突破的T肝细胞活命化的诱发非常脆弱。SP分组用蓝色的中央线和橘色指出，HD分组用金色的中央线和橘色指出，蓝色的中央线/橘色指出NADsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(可不答者)被cfsel标上，treg按通过观察的人口比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活命化肝细胞，培植3天后完成流式肝细胞拳法(CD25反染)和肝细胞因姪分析。HD Treg与HD、SP或sp606可不答者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发花红(b)。(c,d) CD25诱发花红(c)和CD134诱发花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小在此之后的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

推论：我们给出的推论是，来自更快重大突破姪的活命化遗忘CD4+Treg在GITR暗示在此之后赢取了扩张和丰富，强调了进一步研究者Treg在1型白血病安全性形态在此之后的异质性的必要性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28